Η μέτρηση i-STAT® PT/INR είναι ένας καθορισμός ολικού αίματος του χρόνου προθρομβίνης που χρησιμοποιείται στη λαμβανόμενη από το στόμα αντιπηκτική θεραπεία (ουαρφαρίνη). Η μέτρηση καθορίζει το χρόνο που απαιτείται για την πλήρη ενεργοποίηση της εξωγενούς οδού της κλιμακωτής διεργασίας πήξης όταν εκκινείται (ενεργοποιείται) με μία θρομβοπλαστίνη.
Σε μία μέτρηση χρόνου προθρομβίνης, η πήξη εκκινείται με ανάμειξη του δείγματος με θρομβοπλαστίνη ιστού. Σε παραδοσιακές μετρήσεις χρόνου προθρομβίνης, η πλήρης ενεργοποίηση υποδεικνύεται όταν η ενεργοποιημένη θρομβί- νη μετατρέπει το ινωδογόνο σε ινώδες, και εκτεταμένοι ή τοπικοί θρόμβοι ανιχνεύονται με μηχανικά ή οπτικά μέσα. Η μέτρηση i-STAT PT/INR είναι όμοια εκτός από το ότι το τελικό σημείο υποδεικνύεται από τη μετατροπή ενός υποστρώ- ματος θρομβίνης διαφορετικού από ινωδογόνου. Για την ανίχνευση αυτής της μετατροπής χρησιμοποιείται ηλεκτροχη- μικός αισθητήρας.
Το πρόσθετο υπόστρωμα θρομβίνης είναι H-D-φαινυλαλανυλ-πιπεκολυλ-αργινίνη-p-αμινο-p-μεθοξυδιφαινυλαμίνη, με την εξής δομή:
Φαινυλαλανίνη - Πιπεκολικό οξύ - Αργινίνη -- NH - C6H4 - NH - C6H4 - OCH3
Η θρομβίνη διασπά το δεσμό αμιδίου στο καρβοξυ- άκρο του ενσωματωνόμενου κλάσματος μορίου αργινίνης (που υποδεικνύεται από τις δύο παύλες) λόγω του ότι ο δεσμός δομικά ομοιάζει με το δεσμό αμιδίου που διασπάται από τη θρομβίνη στο ινωδογόνο. Το προϊόν της αντίδρασης του υποστρώματος θρομβίνης είναι το ηλεκτροχημικά αδρανές τριπεπτίδιο φαινυλαλανυλ - πιπεκολυλ - αργινίνη και η ηλεκτροενεργή ένωση NH3 + - C6H4 - NH - C6H4 - OCH3. Η δημιουργία της ηλεκτροενεργού ενώσεως ανιχνεύεται αμπερομετρικά, και μετράται ο χρόνος ανίχνευσης.
Το αποτέλεσμα της μέτρησης PT/INR εμφανίζεται ως ένας λόγος International Normalized Ratio (INR) και, προαιρε- τικά, σε δευτερόλεπτα. Το INR είναι η συνιστώμενη μέθοδος εμφάνισης αποτελέσματος για την παρακολούθηση της λαμβανόμενης από το στόμα αντιπηκτικής θεραπείας1. Ένας χρόνος προθρομβίνης Mean Normal i-STAT (sec) και ένα ISI έχουν καθοριστεί σύμφωνα με τις συστάσεις WHO σε ένα ίδρυμα διαπιστευμένο από τον CAP. Τα αποτελέσματα INR υπολογίζονται με χρήση της ακόλουθης εξίσωσης:
Χρόνος προθρομβίνης ασθενούς i-STAT (sec) ISI
INR =_______________________________________________
Μέσος κανονικός χρόνος προθρομβίνης i-STAT (sec)
Οι προαιρετικά εμφανιζόμενες μονάδες δευτερολέπτων αντιπροσωπεύουν τους παραδοσιακούς χρόνους PT πλάσματος. Ο εμφανιζόμενος χρόνος εξάγεται από το αποτέλεσμα PT/INR και την παρακάτω εξίσωση χρησιμοποιώντας ISI 1,05 και τυπικό μέσο κανονικό χρόνο PT πλάσματος 12,0 δευτερόλεπτα.
Χρόνος προθρομβίνης πλάσματος ασθενούς i-STAT (sec) ISI
INR =____________________________________________________________
Μέσος κανονικός χρόνος προθρομβίνης πλάσματοςi-STAT (sec)
Εάν τα αποτελέσματα εμφανίζονται ασύμβατα με την κλινική αξιολόγηση, πρέπει να επανασυλλεχθεί δείγμα του ασθε- νούς και να υποβληθεί σε εκ νέου δοκιμασία με χρήση άλλου υποδοχέα.
Σκοπός χρήσης
Το i-STAT PT/INR είναι μία διαγνωστική μέτρηση in vitro που στοχεύει στην ποσοτική μέτρηση του χρόνου προθρομβί- νης για την παρακολούθηση της από το στόμα λαμβανόμενης αντιπηκτικής θεραπείας με χρήση δειγμάτων φρέσκου τρι- χοειδικού ή φλεβικού ολικού αίματος. Η μέτρηση i-STAT PT/INR δεν προορίζεται για την αξιολόγηση ελλείψεων μεμο- νωμένων παραγόντων. Το PT/INR προορίζεται για χρήση με το i-STAT Portable Clinical Analyzer και i-STAT 1 Analyzer, αλλά δεν θα λειτουργήσει στο Philips Medical Systems (πρώην Agilent Technologies) Blood Analysis Module (BAM). Ως μέρος του συστήματος i-STAT System, η μέτρηση PT/INR προορίζεται για χρήση από εκπαιδευμένο και εξουσιοδοτημένο κλινικό και νοσοκομειακό προσωπικό σύμφωνα με τις πολιτικές και διαδικασίες του αντίστοιχου νοσοκομείου.
Περιεχόμενα
Κάθε υποδοχέας i-STAT PT/INR διαθέτει ένα θάλαμο συλλογής δείγματος, αισθητήρες για την ανίχνευση του τελικού σημείου πήξης, και ξηρά αντιδραστήρια απαραίτητα για να εκκινήσουν και να επιτρέψουν την πήξη. Αδρανή στοιχεία μήτρας και αντιδραστήρια είναι επιστρωμένα σε ένα τμήμα του καναλιού του αισθητήρα και συμπεριλαμβάνουν τα ακόλουθα αντιδραστικά συστατικά:
Αντιδραστικό συστατικό Βιολογική πηγή Θρομβοπλαστίνη ανασυνδυασμένου ιστού Ανθρώπινη Ηπαρινάση I Flavobacterium heparinum Υπόστρωμα θρομβίνης N/A
Μετρολογική ιχνηλασιμότητα
Η μέτρηση χρόνου προθρομβίνης (PT/INR) του συστήματος i-STAT System μετρά το λόγο International Normalized Ratio (χωρίς διάσταση) ο οποίος εκφράζει το σχετικό χρονικό διάστημα που απαιτείται για πλήρη ενεργοποίηση, από τη θρομβοπλαστίνη, της κλιμακωτής διαδικασίας πήξης στο τριχοειδικό ή φλεβικό ολικό αίμα για παρακολούθηση in vitro της από το στόμα λαμβανόμενης αντιπηκτικής θεραπείας (ουαρφαρίνη). Οι τιμές PT/INR που έχουν οριστεί στους ελέγ- χους της i-STAT προέρχονται από τις διεθνείς διαδικασίες μετρήσεων αναφοράς του World Health Organization (WHO) και International Reference Preparation ανθρώπινης ανασυνδυασμένης θρομβοπλαστίνης του WHO2. Οι έλεγχοι του συστήματος i-STAT System έχουν επικυρωθεί για χρήση μόνο το σύστημα i-STAT System και οι ορισμένες τιμές τους ενδέχεται να μην επιδέχονται υποκατάσταση με άλλες μεθόδους. Επιπλέον πληροφορίες σχετικά με τη μετρολογική ιχνηλασιμότητα είναι διαθέσιμες από την i-STAT Corporation.
Αναμενόμενες τιμές
Μέτρηση/Συντομογραφία Μονάδες Επαληθευμένο κλινικό εύρος τιμών Χρόνος προθρομβίνης / (PT/INR) INR 0,9 - 6,0* *Τα χαρακτηριστικά απόδοσης της μέτρησης i-STAT PT/INR δεν έχουν καθοριστεί σε INR άνω του 6,0.
Χαρακτηριστικά απόδοσης
Τα τυπικά δεδομένα απόδοσης που συνοψίζονται παρακάτω συλλέχθηκαν σε νοσοκομειακές εγκαταστάσεις από ιατρικό και νοσηλευτικό προσωπικό εκπαιδευμένο στη χρήση του συστήματος i-STAT System και συγκριτικών μεθόδων.
Ανακρίβεια
Τα τυπικά δεδομένα ανακρίβειας για δείγματα φλεβικού ολικού αίματος παρουσιάζονται στον παρακάτω πίνακα για αντίγραφα δειγμάτων που συλλέχθηκαν σε δύο κλινικές τοποθεσίες. Τα τυπικά δεδομένα ανακρίβειας για δείγματα τριχοειδικού ολικού αίματος παρουσιάζονται για αντίγραφα δειγμάτων που συλλέχθηκαν σε μία κλινική τοποθεσία με χρήση μίας μοναδικής τριχοειδικής ράβδου.
Τα τυπικά δεδομένα ανακρίβειας για υλικό λυοφιλοποιημένου πλάσματος παρουσιάζονται παρακάτω για μελέτες που διενεργήθηκαν σε εγκατάσταση της i-STAT Corporation και κατά τη διάρκεια κλινικών δοκιμών.
Διάστημα αναφοράς
Σε μία μελέτη για τον καθορισμό ενός διαστήματος αναφοράς για PT/INR, φλεβικά δείγματα από υγιείς εθελοντές συλ- λέχθηκαν σε πλαστικούς σωλήνες, και ολικό αίμα αναλύθηκε με μία παρτίδα υποδοχέων στο σύστημα i-STAT System. Τριχοειδικά δείγματα ελήφθησαν από τους ίδιους εθελοντές με χρήση του Softclick Pro (ρύθμιση 3) και αναλύθηκαν στην ίδια παρτίδα υποδοχέων. Τα διαστήματα αναφοράς για INR στα φλεβικά και τριχοειδικά δείγματα καθορίστηκαν σύμφωνα με την οδηγία NCCLS C28-A2.3
Λόγω των πολλών μεταβλητών που μπορεί να επηρεάζουν τα αποτελέσματα PT/INR, κάθε εργαστήριο πρέπει να καθο- ρίσει το δικό του διάστημα αναφοράς.
Σύγκριση μεθόδων
Τα δεδομένα σύγκρισης μεθόδων συλλέχθηκαν σε τρεις κλινικές τοποθεσίες με χρήση ενός πρωτοκόλλου σύμφωνα με την οδηγία NCCLS EP9-A.4 Φλεβικά δείγματα από εξωτερικούς ασθενείς οι οποίοι υποβάλλονταν σε συνήθη στοματι- κή αντιπηκτική θεραπεία συλλέχθηκαν σε πλαστικούς σωλήνες και αναλύθηκαν εις διπλούν σε 3 παρτίδες υποδοχέων στο σύστημα i-STAT System. Πλάσμα από σωλήνες που περιείχαν κιτρικό αντιπηκτικό αναλύθηκαν εις διπλούν στα συγκριτικά όργανα με χρήση αντιδραστηρίου Dade® Innovin®.
Το πρώτο αντίγραφο κάθε δείγματος υποβλήθηκε σε ανάλυση παλινδρόμησης Deming.5 Στον παρακάτω πίνακα σύγκρι- σης μεθόδων, n είναι ο αριθμός των δειγμάτων στο σύνολο δεδομένων, Sy.x είναι το τυπικό σφάλμα της προσέγγισης και r είναι ο συντελεστής συσχέτισης.
Οι συγκρίσεις μεθόδου ποικίλλουν από τοποθεσία σε τοποθεσία λόγω διαφορών στη μεταχείριση των δειγμάτων, στα συστήματα αντιδραστηρίων και οργάνων σε χρήση, καθώς και άλλων εξαρτώμενων από την τοποθεσία μεταβλητών. Πρέπει να εκτελείται μελέτη συσχέτισης για τον καθορισμό των διαφορών μεταξύ της μέτρησης i-STAT PT/INR και άλλων χρησιμοποιούμενων μεθόδων.
Απόδοση άνω του θεραπευτικού εύρους τιμών
Παρουσιάζονται δεδομένα από πολλαπλές τοποθεσίες τα οποία δείχνουν την απόδοση σε επίπεδα PT/INR άνω του θεραπευτικού εύρους τιμών (υψηλότερα από INR 4,0 στο συγκριτικό όργανο). Τα αποτελέσματα από αυτές τις τοποθε- σίες παρουσιάζονται στο παρακάτω γράφημα συσχέτισης. Στη συγκριτική μέθοδο σε όλες τις τοποθεσίες χρησιμοποιή- θηκε ανασυνδυασμένο αντιδραστήριο υψηλής ευαισθησίας (ISI περίπου 1,0) (Dade® Innovin®).
Παράγοντες που επηρεάζουν τα αποτελέσματα
• Η παρουσία εξωγενώς προστιθέμενης ηπαρίνης, κιτρικού ή οξαλικού άλατος ή EDTA από τις συσκευές συλλογής αίματος θα παρεμβληθεί με τα αποτελέσματα της μέτρησης.
• Κακή τεχνική κατά τη δειγματοληψία μπορεί επίσης να μειώσει την ακρίβεια των αποτελεσμάτων. (Βλ. Συλλογή και προετοιμασία δειγμάτων, παρακάτω.)
• Υάλινες σύριγγες ή σωλήνες ενδέχεται να ενεργοποιήσουν την πήξη, προκαλώντας επιταχυνόμενους χρόνους πήξης και χαμηλότερα INR.
• Η μέτρηση i-STAT PT/INR είναι ευαίσθητη σε συγκέντρωση ινωδογόνου μεταξύ 70 και 541 mg/dL.
• Η μέτρηση i-STAT PT/INR δεν επηρεάζεται από ηπαρίνη έως 1,0 U/mL.
• Τιμές αιματοκρίτη μεταξύ 24 - 54% PCV έχει αποδειχθεί ότι δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα.
• Τα αποτελέσματα PT/INR ενδέχεται να επηρεαστούν από συνήθως χορηγούμενα φάρμακα.
Περιορισμοί της μέτρησης
• Ο αναλυτής πρέπει να παραμείνει σε επίπεδη επιφάνεια χωρίς κραδασμούς και με την οθόνη προς τα επάνω κατά τη διάρκεια της μέτρησης.
• Τα φλεβικά δείγματα πρέπει να συλλέγονται σε πλαστικές σύριγγες ή σωλήνες.
Οδηγίες αποθήκευσης
Υποδοχείς σε σφραγισμένες ατομικές συσκευασίες παραμένουν σταθεροί έως την ημερομηνία λήξης εάν αποθηκεύονται σε ψύξη στους 2 έως 8°C και για δύο εβδομάδες σε θερμοκρασία δωματίου (18 - 30°C). Μετά την αφαίρεσή της από συνθήκες ψύξης, μία συσκευασία 24 υποδοχέων απαιτεί εξισορρόπηση μίας ώρας σε θερ- μοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. Μεμονωμένοι υποδοχείς απαιτούν εξισορρόπηση πέντε λεπτών. Ένας υποδοχέας πρέπει να χρησιμοποιείται αμέσως μετά από την αφαίρεσή του από την ατομική του συσκευασία.
Έλεγχος ποιότητας
Σε καθημερινή βάση, η απόδοση όλων των αναλυτών στο σύστημα i-STAT System στο χώρο εργασίας σας πρέπει να επαληθεύεται με χρήση του i-STAT Electronic Simulator.
Κατά την παραλαβή νέων υποδοχέων, επαληθεύστε ότι η θερμοκρασία μεταφοράς ήταν ικανοποιητική, χρησιμοποιώντας την ταινία δείκτη θερμοκρασίας τεσσάρων παραθύρων που εμπεριέχεται στις συσκευασίες των υποδοχέων. Από κάθε αποστολή υποδοχέων, αναλύστε πολλαπλά επίπεδα των i-STAT PT/INR Controls χρησιμοποιώντας οποιονδήποτε επα- ληθευμένο αναλυτή. Αυτοί οι έλεγχοι πρέπει επίσης να χρησιμοποιούνται για την επαλήθευση της απόδοσης των υπο- δοχέων όταν έχετε αμφιβολίες για τις συνθήκες αποθήκευσης.
Οδηγίες για τη χρήση αυτών των ελέγχων παρέχονται στο εγχειρίδιο του συστήματος i-STAT System. Για επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τον έλεγχο ποιότητας στο σύστημα i-STAT System, ανατρέξτε στο τμήμα “Quality Control” (Έλεγχος ποιότητας) των εγχειριδίων των συστημάτων i-STAT και i-STAT 1.
Συλλογή και προετοιμασία δειγμάτων
Προσοχή: Ο υποδοχέας i-STAT PT/INR είναι σχεδιασμένος για να δέχεται δείγμα μεταξύ 20 και 45 μικρόλιτρα. Μία μοναδική σταγόνα αίματος είτε από το δάκτυλο είτε από το άκρο σύριγγας εμπίπτει τυπικά σε αυτό το πεδίο. Εάν χορηγηθεί μεγαλύτερος όγκος στην κοιλότητα δείγματος, να είστε προσεκτικοί όταν κλείνετε τον υποδοχέα καθώς μπορεί να αποβληθεί περίσσιο αίμα από τον υποδοχέα. Η μέτρηση i-STAT PT/INR μπορεί να διεξαχθεί με χρήση τριχοειδικών ή φλεβικών δειγμάτων.
Παρακέντηση δέρματος
1. Αφαιρέστε τον υποδοχέα από την αλουμινένια συσκευασία και τοποθετήστε τον υποδοχέα σε μία επίπεδη επιφάνεια.
2. Προετοιμάστε τη συσκευή λήψης αίματος και φυλάξτε την στην άκρη έως ότου χρειαστεί.
3. Καθαρίστε και προετοιμάστε το δάκτυλο στο οποίο θα γίνει δειγματοληψία. Αφήστε το δάκτυλο να στεγνώσει τελείως πριν από τη δειγματοληψία.
4. Κεντήστε την κάτω πλευρά του άκρου του δακτύλου με τη συσκευή λήψης αίματος.
5. Πιέστε απαλά το δάκτυλο, ώστε να σχηματιστεί μία σταγόνα αίματος που κρέμεται και εκτελέστε τη μέτρηση με το πρώτο δείγμα αίματος. Αποφύγετε τη δυνατή επαναλαμβανόμενη πίεση (“άρμεγμα”) καθώς αυτό μπορεί να προκαλέσει αιμόλυση ή νόθευση του δείγματος με υγρό ιστού.
6. Αγγίξτε με τη σταγόνα αίματος τον πάτο της κοιλότητας δείγματος. Μόλις έλθει σε επαφή με την κοιλότητα δείγματος, το αίμα θα απορροφηθεί στο εσωτερικό του υποδοχέα.
7. Εξακολουθήστε να εφαρμόζετε το δείγμα έως ότου φθάσει στο σημείο πλήρωσης που επισημαίνεται στον υποδοχέα.
8. Διπλώστε το καπάκι δείγματος επάνω από την κοιλότητα δείγματος.
9. Πιέστε το στρογγυλό άκρο του καπακιού για να κουμπώσει στη θέση του.
Σημείωση:
Για να απλοποιήσετε περαιτέρω την εφαρμογή του δείγματος στον υποδοχέα μέτρησης, είναι δυνατό να φέρετε τον υποδοχέα στο δάκτυλο για ευκολότερη εφαρμογή. Βεβαιωθείτε ότι το όργανο παραμένει σε μία επίπεδη επιφάνεια χωρίς κραδασμούς για τη μέτρηση.
Φλεβοπαρακέντηση
• Πρέπει να χρησιμοποιείται τεχνική δειγματοληψίας που να έχει ως αποτέλεσμα καλή ροή του αίματος.
• Το δείγμα προς μέτρηση πρέπει να λαμβάνεται σε πλαστικό μέσο συλλογής (είτε πλαστική σύριγγα είτε πλαστικός εκκενωμένος σωλήνας).
• Το μέσο συλλογής δεν μπορεί να περιέχει αντιπηκτικές ουσίες όπως ηπαρίνη, EDTA, οξαλικό ή κιτρικό άλας.
• Το μέσο συλλογής δεν μπορεί να περιέχει ενεργοποιητές πήξης ή διαχωριστές ορού.
• Το δείγμα πρέπει να μεταφερθεί αμέσως στην κοιλότητα δείγματος ενός υποδοχέα. Μία σταγόνα αίματος πρέπει να έλθει σε επαφή με τον πάτο της κοιλότητας δείγματος. Μόλις έλθει σε επαφή με την κοιλότητα δείγματος, το αίμα θα απορροφηθεί στο εσωτερικό του υποδοχέα.
• Εάν απαιτείται δεύτερη μέτρηση, πρέπει να ληφθεί νέο δείγμα.
Σημείωση:
Ορισμένοι ειδικοί συνιστούν τη λήψη και απόρριψη ενός (φλεβικού) δείγματος τουλάχιστον 1,0 mL πριν από τη δειγματοληψία για μέτρηση πήξης.6
